Теоретические и практические основы количественного анализа с применением конфокальной микроспектроскопии. Феофанов А.В.

Современные методы оптической микроскопии обеспечивают возможность неразрушающего анализа концентраций исследуемых молекул в клетках. Для этого необходимо выполнение следующих условий.

1. Исследуемые молекулы должны обладать собственной флуоресценцией или быть помечены флуорофором, который не искажает их функциональные свойства.

2. Должна быть возможность измерения и анализа полных спектров испускания флуоресценции исследуемых молекул в клетках с субмикронным пространственным разрешением. Альтернативно, в наличии должны быть достоверные данные такого анализа, полученные кем-либо ранее.

3. Должна быть возможность проведения измерений внутриклеточного распределения флуоресценции исследуемых молекул с трехмерным пространственным разрешением.

4. В измерениях должна быть использована одна из описанных ниже или аналогичных по сути методик

Предположим, что молекулы, клеточную концентрацию которых необходимо измерить, удовлетворяют условию №1. Для выполнения условия №2 необходим микроспектрофлуориметр, т.е. прибор, обеспечивающий измерение спектров флуоресценции в заданных точках образца под микроскопом. А для выполнения условия №3 требуется лазерный сканирующий конфокальный микроскоп. Это могут быть два разных прибора, или современный лазерный сканирующий конфокальный микроскоп с возможностью спектрального анализа. Познакомимся с устройством, конструкционными особенностями этих приборов и принципами измерений с их использованием, а затем рассмотрим методики, обеспечивающие количественный клеточный анализ.

 

PDF, 497.3KB
30 июля 2014
|
Разместил: Confocal club
Яндекс.Метрика