Просветленные грызуны - uDISCO (ultimate DISCO)

 

На фото — кровеносная система крысы, просветленной методом uDISCO и окрашенной красителем Texas Red Dextran при помощи перфузии.

Что делать, если анатомический объект имеет сложную пространственную структуру (нейрон с протяженным и разветвленным аксоном, сосуд и т. д.) и не помещается на одном гистологическом препарате? Обычно в таких случаях помогает техника серийных срезов: исследуемый орган нарезается на множество препаратов, а далее, зная их последовательность, можно послойно воссоздать интересующий вас объект. Эта работа весьма трудоемкая, приходится иметь дело с десятками и сотнями срезов, а хотелось бы получать такие изображения, что называется, «в один клик». Однако ткани малопрозрачны, и обычная световая микроскопия фиксированного образца, например целого мозга, не даст сколько-нибудь высокого разрешения из-за сильного рассеивания света внутри препарата.

Для преодоления этой проблемы были разработаны методики просветления тканей, когда липиды и вода замещаются специальными смесями растворителей. Таков, например, метод получения трехмерных изображений органов, просветленных растворителем, 3DISCO (3D imaging of solvent-cleared organs), комбинированный с флуоресцентной микроскопией. Однако его недостатками были малая стабильность флуоресцентных белков и их быстрое выгорание в используемой смеси растворителей.

Недавно исследователям удалось усовершенствовать эту технику. Они подобрали такую смесь замещающих растворителей, которая продлевала время жизни флуоресцентных белков с нескольких дней до месяцев. Новый метод получил название uDISCO (ultimate DISCO).

Центральная нервная система мыши

Центральная нервная система мыши, нейроны которой экспрессируют зеленый флуоресцентный белок (GFP): a — общий вид головного и спинного мозга мыши в флуоресцентном микроскопе; b — общий вид мозга мыши, просветленного методом uDISCO; с — головной мозг мыши, флуоресцентная микроскопия светового листа; d–f — увеличенные участки головного мозга, видны тела нейронов и их отростки; g — дендритный отросток нейрона, заметны отдельные дендритные шипики (белые стрелки). Фото из статьи C. Pan et al., 2016. Shrinkage-mediated imaging of entire organs and organisms using uDISCO


В случае uDISCO просветляющая смесь состоит из бензилового спирта, бензил-бензоата, дифенилового эфира и α-токоферола (витамина E) в качестве антиоксиданта. Коэффициент преломления смеси близок к коэффициенту преломления костной ткани, так что при подготовке пробы не требуется проводить декальцинацию скелета. При обработке объекта смесью растворителей он изотропно сжимается примерно на 50%, что увеличивает разрешающую способность микроскопии (свет проходит меньший путь и рассеивается слабее).

Источник новости по ссылке.

 

 

 

14 октября 2016
|
Автор: Confocal club
Яндекс.Метрика